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1.常规下载方式:prefetch
对于常规下载sra数据来说,NCBI提供了它自己的一套工具(SRA-Toolkit),其中用prefetch来下载数据,用fastq-dump来解压数据。
1.1 首先需要获取数据信息
一般来说,我们需要下载的数据都是来自于文献已经发表的,在文献中都会给一个GEO号,它长这个样子GSE106826。 然后我们就可以直接到GEO DataSets中去搜索该数据集中的数据了。如下图所示,直接点击Search:
然后我们就可以转到这个有文章title的界面,如下所示:
点击进去就可以进入该GEO号对应的数据集了:
那么我们的sra文件在哪里呢?可以看到下边有一个SRA SRP124852,没错,就是它了!点进去:
然后选择任意一个连接点进去,进入到一个像这样的界面:
点击里边的All run, 最终,终于找到了我们所有sra信息所在的位置:
在这个页面里,我们需要下载两个table,就是Download下边的两个:RunInfo Table 和 Accession List. 其中RunInfo Table会告诉你sample的信息,比如是什么细胞类型,来自什么组织;而Accession List则是储存里我们sra文件的获取序列号:
$ cat SRR_Acc_List.txt
SRR6283792
SRR6283793
1.2 然后用prefetch下载数据
有了以上的sra Accession number,就可以直接用脚本命令下载数据了。
# 切换到SRR_Acc_List.txt所在的文件夹
$ ls
SRR_Acc_List.txt
# 然后用以下命令下载
$ prefetch `less SRR_Acc_List.txt`
#如果想要后台运行可以使用nohup加&
#这样即使退出终端也不会断掉的
$ nohup prefetch `less SRR_Acc_List.txt` &
2. sacp ,飞一般的下载速度
2.1 安装ascp
wget http://download.asperasoft.com/download/sw/connect/3.7.4/aspera-connect-3.7.4.147727-linux-64.tar.gz
tar zxvf aspera-connect-3.7.4.147727-linux-64.tar.gz
# install
bash aspera-connect-3.7.4.147727-linux-64.sh
# check the .aspera directory
cd # go to root directory
ls -a # if you could see .aspera, the installation is OK
# add environment variable
echo 'export PATH=~/.aspera/connect/bin:$PATH' >> ~/.bashrc
source ~/.bashrc
# check help file
ascp --help
2.2 了解数据储存结构
注意!最近突然发现以下这个路径找不到文件了,可能NCBI储存结构已经改变,请看后边ENA部分!
NCBI的ftp网站上可以找到我们想要的sra文件,如果你比较一下就会发现,这些储存的连接是有规律可循的,如下两个文件:
ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/sra/sra-instant/reads/ByRun/sra/SRR/SRR690/SRR6904179/SRR6904179.sra
ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/sra/sra-instant/reads/ByRun/sra/SRR/SRR690/SRR6904180/SRR6904180.sra
你会发现它们前半部分都是一样的,都以ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/sra/sra-instant/reads/ByRun/sra/SRR/开头,而后边紧跟的是SRR 序列号SRR6904179的前6位SRR690,然后就是序列号SRR6904179,再后边就是序列号加一个后缀.sraSRR6904179.sra.
由于最近NCBI的sra数据找不到具体储存路径了,所以就从ENA数据库下载吧,ENA和NCBI存储的数据是一样的,所以不用担心数据问题,而且ENA储存的是fastq格式,更是省去了下载后从sra到fastq转化这一步骤,简直完美!
ENA 的数据结构是这样的:
http://ftp.sra.ebi.ac.uk/vol1/fastq/SRR121/SRR121621/SRR121621_1.fastq.gz
http://ftp.sra.ebi.ac.uk/vol1/fastq/SRR121/SRR121621/SRR121621_2.fastq.gz
基本是和ncbi之前的存储类似的,这里不再赘述。以下是下载一个文件的示例:
ascp -QT -l 300m -P 33001 -i ~/.aspera/connect/etc/asperaweb_id_dsa.openssh era-fasp@fasp.sra.ebi.ac.uk:/vol1/fastq/SRR121/SRR121621/SRR121621_1.fastq.gz path/to/download_dir
需要注意,下载时文件地址前统一用era-fasp@fasp.sra.ebi.ac.uk:开头,后边跟随文件地址/vol1/fastq/SRR121/SRR121621/SRR121621_1.fastq.gz,中间是:连接,不是/,一定要注意!!
如果是下载多个文件的话,首先像用prefetch那样拿到GEO序列号,然后用一个循环脚本就可以搞定了:
ftp='era-fasp@fasp.sra.ebi.ac.uk:/vol1/fastq'
mkdir sra # make a output directory
cat SRR_Acc_List.txt | while read i
do
SRR=$(echo ${i:0:6})
# ascp -QT -l 300m -P 33001 -i ~/.aspera/connect/etc/asperaweb_id_dsa.openssh ${ftp}/${SRR}/${i}/{i}.fastq.gz ./sra 单端测序的话只有这一个文件
ascp -QT -l 300m -P 33001 -i ~/.aspera/connect/etc/asperaweb_id_dsa.openssh ${ftp}/${SRR}/${i}/${i}_1.fastq.gz ./sra
ascp -QT -l 300m -P 33001 -i ~/.aspera/connect/etc/asperaweb_id_dsa.openssh ${ftp}/${SRR}/${i}/${i}_2.fastq.gz ./sra
done
实测ascp下载速度可达150M/s,如果你的网络给力还可以更快!
3. wget 下载sra文件
之前经常使用prefetch下载sra文件,而且量比较大,但是经常会出现time-out这种情况,会导致很多文件下载不下来,所以就考虑用wget试一下。但是这个真的不建议,除非你没有办法的情况下。wget很容易断点导致数据不完整!
数据来源的话依然参考上边ENA部分,脚本也基本相同,如下:
注意这次网址直接使用的是:http://ftp.sra.ebi.ac.uk/vol1/fastq
ftp='http://ftp.sra.ebi.ac.uk/vol1/fastq'
mkdir sra # make a output directory
cat SRR_Acc_List.txt | while read i
do
SRR=$(echo ${i:0:6})
# wget -c -t 0 -P ./sra ${ftp}/${SRR}/${i}/${i}.fastq.gz 单端只有一个文件
wget -c -t 0 -P ./sra ${ftp}/${SRR}/${i}/${i}_1.fastq.gz
wget -c -t 0 -P ./sra ${ftp}/${SRR}/${i}/${i}_2.fastq.gz
done
参数说明:
-c 自动断点续传,一定要加!否则数据会有不完整的情况
-t 配合-c参数,设置为0表示连接失败后无限次重新尝试,直到成功为止
-P 表示把数据下载到指定文件夹下
三种方法比较下,首先推荐ascp,速度是真的快啊;其次是prefetch,速度一般般,很容易下载失败,需要多次尝试重新下载;最不推荐的是wget,但是如果以上两种方式你都不适用,那就试试这个吧。
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