多肽抗原制备FAQ

多肽抗原制备FAQ

一、为什么要进行N端乙酰化和C端酰胺化修饰？

     化学合成的肽往往携带游离的氨基和游离的羧基。而肽的序列往往代表了母本蛋白的序列，为了与母本蛋白更为接近，肽末端往往需要封闭，即N端乙酰化和C端酰胺化，这些修饰会减少多肽的总电荷，降低多肽的溶解度，也可以使肽模拟它在母本蛋白中α氨基和羧基的原始状态。

二、多肽修饰的种类有哪些？

      多肽修饰种类繁多，可以简单划分为后修饰和过程修饰（利用衍生化的氨基酸修饰），从修饰位点不同则可分为N端修饰、C端修饰、侧链修饰、氨基酸修饰、骨架修饰等。作为一种改变肽链主链结构或侧链基团的重要手段，多肽修饰可有效改变肽类化合物的理化性质、增加水溶性、延长体内作用时间、改变其生物分布状况、消除免疫原性、降低毒副作用等。

三、适合交联的多肽长度[1]是多少？

      通常建议10-15个残基进行交联。肽链越长，抗体识别的区域越多，但也就越多机会形成稳定的二级结构。就不再是天然的形式了。太短的肽通常是没有用的，除非有充足的理由，如与相关家族蛋白或其他蛋白有序列同源性等。

四、多肽抗原与天然蛋白相比优势在哪？

      多肽抗原与天然抗原或重组蛋白比较的优势在于抗原表位优势富集，更好刺激机体产生抗体。人工合成多肽制备抗原主要应用于抗原难以提取，或难于通过重组表达来实现的，或者蛋白抗原本身与机体内其他蛋白同源性过高的抗体制备。

五、多肽偶联常用方案[2]有哪些？

      -SH偶联（通过Sulfo-SMCC试剂介导，合成时需要在多肽的N-端或者C-端加上一个Cys引出一个游离的-SH）和-COOH/-NH2偶联（通过NHS/EDC或者EDC介导交联）；-SH偶联可以实现精确定向连接。

六、多肽的溶解和保存方法是？

      多数肽易溶于无菌的PBS；对于碱性肽来说，如果一开始用PBS溶解不了，可以尝试10%或者更高浓度的乙酸溶解。如果肽仍然不溶解，加入小于1/20体积的TFA溶解；对于酸性肽来说，如果PBS不溶解，加入1/20体积的稀氨水溶解；对于极疏水的肽，用10%的乙腈或甲醇溶解。

      粉末状的多肽可以保存于-40度几年，溶液肽远不如冻干形式稳定，溶液应为中性pH（pH5-7），-20℃保存，避免反复冻融。

七、多肽抗原用于免疫时的注意事项[3]

       佐剂与抗原一定要充分混匀，以混匀后静置长时间不分层作为混匀充分的标准。每种抗原大概1.5mL，一般皮下免疫四到五点，每点大约0.25mL，每点间隔大约1-2cm，多点免疫有助于抗原吸收。免疫过程中尽量避免扎到血管，引起出血和感染。

八、 蛋白交联剂SMCC是什么[4]？

      蛋白交联剂是一类小分子化合物，具有2个或者更多的针对特殊基团（-NH2、-COOH、-HS等）的反应末端，可以和2个或者更多的分子分别进行偶联，从而使这些分子结合在一起，形成共轭蛋白。

       SMCC是一类含有N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活性酯和马来酰胺的双功能偶联剂，可以将分别含有巯基和氨基的化合物键接在一起。该交联剂可渗透到细胞膜的脂质双层中，NHS活性酯与伯胺在pH6.5-7.5的环境下形成稳定的硫醚键。

       卡梅德生物（KMD Bioscience）(https://www.kmdbioscience.cn/)提供的是标准的线性肽，并可根据客户的项目需求，提供各种修饰肽合成服务。修饰肽广泛应用于多肽药物研究、免疫学、诊断学、生物催化剂、抗体修饰和多肽试剂等领域。卡梅德生物提供多种多肽修饰的服务，我们可以对多肽序列进行酰胺化或乙酰化，对二硫键进行修饰，也可标记多肽；我们主要使用BSA、KLH以及OVA进行多肽偶联服务。卡梅德生物提供的多肽修饰与偶联服务是基于我们技术专家的丰富经验以及先进技术，我们可以满足客户的多种需求。

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[1]范江,曹者瑜.人工合成多肽抗原检测血清HIV抗体的研究[J].中国医学科学院学报, 1993,000(002):128-131.

[2]郑多,陈程,杜杰,等.多肽和多肽偶联物及其制备方法和应用:CN202010620590.3[P].CN111647049A[2023-10-18].

[3]范江,曹者瑜.人工合成多肽抗原检测血清HIV抗体的研究[J].中国医学科学院学报, 1993,000(002):128-131.

[4]刘运洪,夏勇武,孙炎,等.基于多肽抗原的抗人TTC36的单克隆抗体制备及其在免疫组化中的应用[J].中国细胞生物学学报, 2020, 42(10):8.